本研究測(cè)試了腸桿菌肽-羅伊氏菌素復(fù)合物、羅伊氏乳桿菌對(duì)肉雞的生長(zhǎng)性能、盲腸微生物群落組成和代謝物的影響。結(jié)果表明0.08 μmol/L腸桿菌肽聯(lián)合5 mmol/L羅伊氏菌素（10RJ）可促進(jìn)腸道有益菌的增值并改變腸道代謝組，這種無抗組合顯著改善肉雞生長(zhǎng)性能，達(dá)到了抗生素類似效果，適合作為抗生素生長(zhǎng)促進(jìn)劑的替代品。
1、前言
腸道微生物群落具有促進(jìn)免疫健康，改善飼料消化和養(yǎng)分吸收，改善食品性動(dòng)物生長(zhǎng)性能的重要作用?？股卦趧?dòng)物生產(chǎn)中的持續(xù)使用導(dǎo)致了病原體的耐藥性。因此，科學(xué)家們正在不斷地尋找抗生素的天然替代品。抗菌肽是一種蛋白質(zhì)類分子，通過在細(xì)胞膜上形成氣孔或抑制細(xì)胞壁的合成，產(chǎn)生抑菌或殺菌活性。腸桿菌肽對(duì)包括大腸桿菌和沙門氏菌在內(nèi)的幾種革蘭氏陰性病原菌具有殺菌作用。其獨(dú)特的套索結(jié)構(gòu)使其對(duì)熱變性和應(yīng)激性胃腸道疾病具有很強(qiáng)的抵抗力。由于這些特點(diǎn)，腸桿菌肽已被研究作為肉雞生產(chǎn)中常規(guī)抗生素生長(zhǎng)促進(jìn)劑的替代品。益生菌的優(yōu)勢(shì)特征包括在胃腸道中存活和定植，以及分泌蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶。羅伊氏乳桿菌在適宜的培養(yǎng)條件下，能將甘油轉(zhuǎn)化為羅伊氏菌素，這是一種對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌有很強(qiáng)抑制作用的水溶性抑制劑，在較寬的pH范圍內(nèi)不受水解酶的影響。目前還沒有研究羅伊氏菌素和腸桿菌肽聯(lián)合應(yīng)用對(duì)肉雞生長(zhǎng)的影響。聯(lián)合使用可能會(huì)降低每種抗菌化合物的有效使用濃度，而且不易出現(xiàn)耐藥性。在我們之前的研究中，與單獨(dú)使用它們相比，低濃度的羅伊氏菌素和腸桿菌肽（RJ）組合已經(jīng)被證明在減少雞身體上的腸沙門氏菌數(shù)量方面具有協(xié)同作用。
2、材料和方法
2.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)
選用1日齡科寶肉雞（公雞2176只），隨機(jī)分為8個(gè)處理組。每個(gè)處理由8個(gè)重復(fù)組成，每個(gè)重復(fù)34只雞，飼養(yǎng)35d。試驗(yàn)期間動(dòng)物自由采食。溫度和照明按照行業(yè)建議進(jìn)行控制。每小時(shí)記錄一次溫度和水分含量。
（注：0.08 μmol/L腸桿菌肽=0.168μg/L腸桿菌肽，即每噸水添加腸桿菌肽168克）
2.2 試驗(yàn)測(cè)定指標(biāo)
每欄記錄每個(gè)生長(zhǎng)階段的采食量和飼料轉(zhuǎn)化率。分別在第0、7、10、22、35天測(cè)量體重和平均日增重。死亡率每天都有記錄。盲腸代謝組分析、盲腸微生物DNA的提取與分析（詳情見原文）。
3、結(jié)果
3.1 生長(zhǎng)性能
試驗(yàn)處理對(duì)肉雞的體重、采食量、平均日增重、飼料轉(zhuǎn)化率和死亡率的影響如表1所示。與陰性對(duì)照組（NC組）相比，陽(yáng)性對(duì)照組（PC組）和10RJ組的采食量、體重和平均日增重顯著提高（P<0.05）。除E6Lr組外，NC組的病死率與其他組無顯著差異（P>0.05）。由于1RJ、5RJ和羅伊氏乳桿菌處理組與NC組無顯著差異，且無正向促生長(zhǎng)作用，因此進(jìn)一步的研究比較分析集中在10RJ處理組。
3.2 盲腸內(nèi)容物的微生物組成
PCoA圖中，圓圈表示樣品的聚集和分散程度，圈與圈之間越接近表明物種組成越相似。PCoA表明，陰性對(duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組、10RJ組組成不同。
shannon值（香農(nóng)指數(shù)）越大表示微生物多樣性越高。香農(nóng)指數(shù)在不同處理之間沒有顯著的統(tǒng)計(jì)差異，這表物種豐富度可能是差異的驅(qū)動(dòng)因素。
在門水平鑒定出的前5個(gè)門分別是厚壁菌門（Firmicutes），擬桿菌門（Bacteroidetes），軟壁菌門（Tenericutes），變形菌門（Proteobacteria），放線菌門（Actinobacteria）。相比NC組，PC組和10RJ組的厚壁菌門、擬桿菌門升高，變形菌門降低。
在科水平，理研菌科（Rikenellaceae）在陰性對(duì)照組中最多，瘤胃球菌科（Ruminococcaceae）和毛螺菌科（Lachnospiraceae）在PC和10RJ組最多。
在OTU水平，盲腸共有2970個(gè)物種水平的OTU。陽(yáng)性對(duì)照組和10RJ組均減少了OTU 2-Alistipes（P<0.05）。Alistipes是擬桿菌門的一個(gè)亞屬，而擬桿菌門通常與人類慢性腸道炎癥有關(guān)，10RJ處理可以降低盲腸被此類病原體污染的風(fēng)險(xiǎn)，從而有助于保持良好的屠體質(zhì)量。
在屬水平用網(wǎng)絡(luò)分析研究了菌群間連通性。乳桿菌和擬桿菌豐度較高，連通性強(qiáng)，并與其他多個(gè)菌有相互作用。
眾所周知，腸道微生物組成了一個(gè)與宿主具有共生關(guān)系的復(fù)雜生態(tài)系統(tǒng)，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用。腸道菌群組成的變化影響宿主的代謝。
3.3 盲腸內(nèi)容物中的微生物代謝物
抗生素組和10RJ組對(duì)微生物代謝物的影響不同。在10RJ組，乙酸、丙酸和丁酸等短鏈脂肪酸（SCFA）含量都比陰性對(duì)照組高，而抗生素組所有短鏈脂肪酸的濃度都低于陰性對(duì)照組。短鏈脂肪酸是腸道微生物碳水化合物代謝的主要產(chǎn)物，是微生物活性的指標(biāo)。10RJ處理創(chuàng)造了一個(gè)對(duì)宿主友好的腸道環(huán)境（A）。偏最小二乘回歸圖（PLS-DA）不同顏色表示不同組別，距離越遠(yuǎn)表明組間差異越大。圖中可以看出抗生素和10RJ改變了肉雞腸道微生物代謝組。而與抗生素相比，10RJ可被視為對(duì)家禽腸道健康和整體性能更有利（B）。
4、結(jié)論
0.08 μmol/L腸桿菌肽聯(lián)合5 mmol/L羅伊氏菌素（10RJ）可促進(jìn)腸道有益菌的增值并改變腸道代謝組，這種無抗組合顯著改善肉雞生長(zhǎng)性能，達(dá)到了抗生素類似效果，適合作為抗生素生長(zhǎng)促進(jìn)劑的替代品。
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