實驗室簡明評估穎泰三號抑菌效果報告

時間：2021-11-19 瀏覽：4199次

詳細(xì)說明

穎泰三號主要成分是枯草芽孢桿菌及產(chǎn)生的枯草菌肽抗菌肽，枯草菌肽由37個氨基酸組成，結(jié)構(gòu)中含有兩個α-螺旋、一個連接環(huán)和兩個二硫鍵。其成分明確，結(jié)構(gòu)清晰，可有效殺滅產(chǎn)氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌和化膿性鏈球菌等革蘭氏陽性菌。

通過不同方法檢測穎泰三號和其他同類芽孢桿菌產(chǎn)品的抑菌性能，評估不同產(chǎn)品對產(chǎn)氣莢膜梭菌和金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌的抑菌效果，為飼料廠在替代抗生素方面的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

試驗一：比濁法（共培養(yǎng)）測定

穎泰三號的抑菌率

試驗?zāi)康模?/span>

通過比濁法測定穎泰三號、國產(chǎn)地衣芽孢桿菌和進(jìn)口枯草芽孢桿菌等3個產(chǎn)品發(fā)酵液不同濃度下對產(chǎn)氣莢膜梭菌CVCC2027、金黃色葡萄球菌CMCC26003等2種細(xì)菌的抑菌率，評估不同產(chǎn)品的抑菌效果。

試驗方法：參照藥典方法，分別取0.1mL產(chǎn)氣莢膜梭菌CVCC2027、金黃色葡萄球菌CMCC26003細(xì)菌菌液，加入含10mL LB液體培養(yǎng)基的滅菌試管中，再將制備好的3個待測樣品溶液分別按照1%、3%、6%的濃度（0.1mL、0.3mL、0.6mL）加入前述試管中。同時設(shè)立空白對照（試管內(nèi)只加LB液體培養(yǎng)基和細(xì)菌菌液）。

37℃培養(yǎng)，24小時后測定各試管菌液OD_600nm（用LB培養(yǎng)基調(diào)零），記錄、計算各產(chǎn)品不同濃度下的抑菌率。

抑菌率=（A_空-A_樣）/A_空*100%

注：A_空：空白對照組24h OD值；

A_樣：樣品組24h OD值。

試驗結(jié)果如下：

圖1.1 穎泰三號和其他芽孢桿菌產(chǎn)品對2種細(xì)菌的抑菌率

試驗圖片（每個圖片上的試管從左至右依次為：1%、3%、6%、對照）如下：

圖1.2 穎泰三號對2種細(xì)菌的抑菌效果

圖1.3 國產(chǎn)地衣芽孢桿菌對2種細(xì)菌的抑菌效果

圖1.4 進(jìn)口枯草芽孢桿菌對2種細(xì)菌的抑菌效果

結(jié)論：

針對產(chǎn)氣莢膜梭菌CVCC2027，國產(chǎn)地衣芽孢桿菌效果最弱，抑菌率低于90%，在6%最大濃度下，進(jìn)口枯草芽孢桿菌抑菌率為91.2%，穎泰三號1%濃度下，抑菌率即達(dá)到99.6%，遠(yuǎn)高于其他2種產(chǎn)品；針對金黃色葡萄球菌 CMCC26003，穎泰三號效果最優(yōu)，3%濃度下，抑菌率為97.9%，為國產(chǎn)地衣芽孢桿菌的1.96倍，進(jìn)口枯草芽孢桿菌產(chǎn)品無抑菌效果。

試驗二：打孔法測定穎泰三號對產(chǎn)氣莢膜梭菌的最小抑菌濃度

試驗?zāi)康模和ㄟ^打孔法測定穎泰三號、國產(chǎn)地衣芽孢桿菌和進(jìn)口枯草芽孢桿菌等3個產(chǎn)品對5株產(chǎn)氣莢膜梭菌的最小抑菌濃度，評估不同產(chǎn)品的抑菌效果。

試驗方法：將3個樣品益生菌活化，于LB培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)16h，之后將各產(chǎn)品發(fā)酵液離心，取其上清液，用無菌水2倍梯度稀釋依次制備成1/2、1/4、1/8、……、1/256的樣品溶液，備用。

將各細(xì)菌菌液加入到TSC培養(yǎng)基中，之后倒入放有牛津杯的素瓊脂培養(yǎng)皿中，取出牛津杯，吸取150μL不同濃度的各樣品溶液加入到相應(yīng)的孔內(nèi)，同時設(shè)立滅菌水為空白對照，并在培養(yǎng)皿上做好標(biāo)記。

將加過樣的培養(yǎng)皿移入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16h，測量、記錄抑菌圈。

試驗結(jié)果如下：

表2.1 穎泰三號和其他芽孢桿菌產(chǎn)品對5株產(chǎn)氣莢膜梭菌的抑菌圈對比

注：1.抑菌圈直徑單位：mm，“—”表示沒有抑菌圈；2. CVCC2027購自于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，豬產(chǎn)氣莢膜梭菌1和2，雞產(chǎn)氣莢膜梭菌1和2分別分離自不同的豬場和雞場，下同。

3種產(chǎn)品對不同產(chǎn)氣莢膜梭菌的MIC：

表2.2 穎泰三號和其他芽孢桿菌產(chǎn)品對5種產(chǎn)氣莢膜梭菌的MIC

本次試驗各孔樣品設(shè)置如下：

試驗圖片（標(biāo)注濃度樣品孔處為各產(chǎn)品MIC位置圈）如下：

圖2.1 不同產(chǎn)品對產(chǎn)氣莢膜梭菌CVCC2027的抑菌圈

圖2.2 不同產(chǎn)品對豬產(chǎn)氣莢膜梭菌1的抑菌圈

圖2.3 不同產(chǎn)品對豬產(chǎn)氣莢膜梭菌2的抑菌圈

圖2.4 不同產(chǎn)品對雞產(chǎn)氣莢膜梭菌1的抑菌圈

圖2.5 不同產(chǎn)品對雞產(chǎn)氣莢膜梭菌2的抑菌圈

結(jié)論：

同等濃度下，穎泰三號對5種產(chǎn)氣莢膜梭菌的抑菌圈直徑最大，在1/64濃度時，抑菌圈直徑最低為16.3mm，屬極敏感抗菌物質(zhì)；穎泰三號對產(chǎn)氣莢膜梭菌CVCC2027的MIC值為≤1/256，對另外四株臨床分離型菌株的MIC值均為1/128，其MIC值最低，抑菌效果最好。

注：以上數(shù)據(jù)均來自農(nóng)業(yè)農(nóng)村部飼用抗生素替代技術(shù)重點實驗室。

綜上所述

通過不同的檢測方法評估穎泰三號和其他同類芽孢桿菌產(chǎn)品的抑菌效果，在殺滅產(chǎn)氣莢膜梭菌和金黃色葡萄球菌等對養(yǎng)殖業(yè)危害較大的環(huán)境常在菌上，穎泰三號抑菌率、抑菌圈和MIC均優(yōu)于其他同類產(chǎn)品，在飼料禁抗，養(yǎng)殖減抗大背景下，穎泰三號可有效替代抗生素，減少疾病發(fā)生率，提高生產(chǎn)成績。

撰稿：成鵬、李洪宇

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